Els principis darrere de cada PCR, sigui quina sigui la mostra d'ADN, són els mateixos.
Es requereixen cinc "ingredients" bàsics per configurar una PCR. Explicarem exactament què fa cadascun d'ells a mesura que avancem. Aquests són:
- la plantilla d'ADN a copiar
- primers, trams curts d'ADN que inicien la reacció de PCR, dissenyats per unir-se a banda i banda de la secció d'ADN que voleu copiar
- Bases de nucleòtids d'ADN?(també coneguts com dNTP). Les bases d'ADN (A, C, G i T) són els blocs de construcció de l'ADN i són necessàries per construir la nova cadena d'ADN.
- Enzima Taq polimerasa?per afegir les noves bases d'ADN
- tampó per garantir les condicions adequades per a la reacció.
La PCR implica un procés d'escalfament i refrigeració anomenat cicle tèrmic que es realitza mitjançant màquina.
Hi ha tres etapes principals:
- Desnaturalització– quan s'escalfa l'ADN plantilla de doble cadena per separar-lo en dues cadenes simples.
-
Recuit– quan es redueix la temperatura per permetre que els cebadors d'ADN s'uneixin a l'ADN plantilla.
-
Estenent– quan la temperatura augmenta i la nova cadena d'ADN és fabricada per l'enzim Taq polimerasa.
Aquestes tres etapes es repeteixen 20-40 vegades, duplicant el nombre de còpies d'ADN cada vegada.
Una reacció de PCR completa es pot realitzar en poques hores, o fins i tot menys d'una hora amb determinades màquines d'alta velocitat.
Un cop finalitzada la PCR, es pot utilitzar un mètode anomenat electroforesi per comprovar la quantitat i la mida dels fragments d'ADN produïts.